人抗甲狀腺過氧化物酶抗體ELISA試劑盒Kit|TPO-Ab說明書

產品名稱：人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA試劑盒

別名：人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA檢測試劑盒；人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA酶免試劑盒；人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）ELISA Kit

英文名稱：Human anti-Thyroid-Peroxidase antibody （TPO-Ab） ELISA Kit

規格：96T*1

檢測范圍：0.1 mIU/L -4 mIU/L 

試劑盒保存：4°C

有效期：一年

預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等其它相關液體中TPO-Ab含量。

實驗原理：本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）水平。用純化的人甲狀腺過氧化物酶（TPO-Ab）抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab），再與HRP標記的抗甲狀腺過氧化物酶（TPO-Ab）抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPO-Ab）濃度。

試劑盒組成：

操作步驟：

1、標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為3mIU/L，2 mIU/L ，1 mIU/L，0.5 mIU/L， 0.25 mIU/L）。

2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3、  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4、  配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5、  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6、  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7、  溫育：操作同3。

8、  洗滌：操作同5。

9、  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10、            終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11、            測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項：

1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

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